head-wadnongpanjan-min
วันที่ 18 กรกฎาคม 2024 10:52 AM
ยินดีต้อนรับเข้าสู่เว็บไซต์ โรงเรียนวัดหนองพันจันทร์
โรงเรียนวัดหนองพันจันทร์
หน้าหลัก » นานาสาระ » โปรตีน อธิบายเกี่ยวกับการทำงานที่ปลอดเชื้อและการศึกษาโปรตีนในเซลล์

โปรตีน อธิบายเกี่ยวกับการทำงานที่ปลอดเชื้อและการศึกษาโปรตีนในเซลล์

อัพเดทวันที่ 15 มิถุนายน 2023

โปรตีน แอนติไซโตไคน์ แอนติบอดีถูกดูดซับบนเฟสของแข็งที่มีรูพรุนของจานเพาะเชื้อ แอนติบอดีนี้เป็นกับดักสำหรับไซโตไคน์ที่หลั่งออกมา เซลล์ทดสอบถูกวางไว้ในแท็บเล็ต ระงับในความเข้มข้นต่างๆตั้งแต่ 105 ถึง 206 ใน 1 มิลลิลิตร สารกระตุ้นถูกเติมเข้าไปในเซลล์ในความเข้มข้นต่างๆ ระบบได้รับการปลูกฝังภายใต้สภาวะที่เหมาะสมเป็นเวลา 2 ถึง 24 ชั่วโมงขึ้นไปเลือกให้เหมาะสมที่สุด สภาพการทำงานที่ไม่ผ่านการฆ่าเชื้อ ล้างบ่อน้ำให้สะอาดก่อนด้วยน้ำ

เพื่อขจัดเซลล์จากนั้นใช้บัฟเฟอร์สำหรับล้างและผงซักฟอก 0.1 เปอร์เซ็นต์ เพื่อชะล้างสิ่งตกค้างที่เกาะไม่ดีออก คอนจูเกตของแอนติบอดีที่กำลังพัฒนากับไบโอตินจะถูกเพิ่มลงในบ่อฟักเป็นเวลา 2 ชั่วโมง ล้างและเพิ่มคอนจูเกตอะวิดินเปอร์ออกซิเดส ฟักเป็นเวลา 1 ชั่วโมง ล้างและเพิ่มส่วนผสมของซับสเตรต AEC อะมิโน-เอทิลคาร์บาโซล เริ่มแรกละลายใน N-ไดเมทิลฟอร์มาไมด์ 100 มิลลิกรัม AEC ต่อ 10 มิลลิลิตร DMF จนถึงความเข้มข้นสุดท้าย

โปรตีน

ในบัฟเฟอร์อะซิเตต 0.1 โมลาร์ pH 5 และบวกกับไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ สูตรอาหาร ส่วนผสมของซับสเตรต ไมโครลิตรของสารระเหยเมทริกซ์ AEC บวกกับบัฟเฟอร์อะซิเตท 10 มิลลิลิตร บวกกับไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ 30 เปอร์เซ็นต์ 5 ไมโครลิตร ปฏิกิริยาจะหยุดลงภายใต้การควบคุมด้วยสายตาหลังจาก 5 ถึง 50 นาทีโดยการล้างจานด้วยน้ำ จานแห้งที่อุณหภูมิห้องในที่มืดเป็นเวลา 2 ชั่วโมง ลงทะเบียนผลลัพธ์กล่าวคือนับจุดด้วยตนเอง

ภายใต้กล้องจุลทรรศน์ที่เหมาะสม ผลลัพธ์จะได้รับในระบบไบนารีจำนวนมากหรือน้อย หรือในอุปกรณ์พิเศษที่อ่านภาพด้านล่างของบ่อด้วย กล้องวิดีโอและโปรแกรมคอมพิวเตอร์ที่เหมาะสม สำหรับการวิเคราะห์เฉพาะจุด ได้รับผลดิจิทัล ผลลัพธ์ที่ได้รับใน ELISPOT วิธีการที่ศึกษาโปรตีนในส่วนของเซลล์และนิวเคลียสภายในเซลล์ ปัจจัยการถอดความ โมเลกุลสัญญาณและอื่นๆ วิธีการของอิมมูโนแอสเซย์แบบโซลิดเฟส เช่น ELISA ยังใช้ในการศึกษากระบวนการระดับโมเลกุล

การส่งสัญญาณจากตัวรับเมมเบรนเข้าสู่เซลล์ การทดลองประเภทนี้ประกอบด้วยสองขั้นตอน ขั้นตอนการค้นหาที่สร้างสรรค์คือการสร้างแบบจำลอง สำหรับการกระตุ้นเซลล์ที่มีชีวิตบางชนิดในร่างกาย หรือในการเพาะเลี้ยงในหลอดทดลอง ขั้นตอนทางเทคนิค การสลายตัวของเซลล์โดยไม่มีการเสียสภาพของโมเลกุลขนาดใหญ่ การตรวจจับโมเลกุลสัญญาณที่ต้องการโดยวิธีการดักจับ ELISA แอนติบอดีจำเพาะสูงต่ออีพิโทปที่มีลักษณะเฉพาะของสถานะของโมเลกุลถูกกระตุ้น

ตัวอย่างเช่นตำแหน่งฟอสโฟรีเลชันของโปรตีนจำเพาะ ที่เกี่ยวข้องกับการส่งสัญญาณ ถูกใช้เป็นกับดักบนเฟสของแข็ง ในเรื่องนี้ระบบทดสอบเชิงพาณิชย์เพื่อจุดประสงค์นี้เรียกว่าฟอสโฟเอลิซา โปรตีนในเซลล์ได้รับการศึกษาเพื่อวิเคราะห์เส้นทางโมเลกุลที่เฉพาะเจาะจง สำหรับการนำสัญญาณในเซลล์ เช่น เส้นทางการกำหนดไคเนสเฉพาะฟอสฟาเตส รวมถึงโปรตีนอะแดปเตอร์ ปัจจัยการถอดรหัส ในการศึกษาโปรตีนไซโตพลาสมิกภายในเซลล์ และอนุพันธ์ของพวกมัน

เซลล์ที่น่าสนใจจะถูกล้างออกจากสารนอกเซลล์อย่างทั่วถึง โดยการหมุนเหวี่ยง2ถึง3ครั้ง 800 กรัม 5ถึง6นาที ในน้ำเกลือบัฟเฟอร์ฟอสเฟต หลังจากนั้นจะถูกสลายด้วยบัฟเฟอร์ขององค์ประกอบต่อไปนี้ อย่างใดอย่างหนึ่งที่เป็นไปได้ ตัวยับยั้งของซีรีนโปรตีเอส ทริปซินและไคโมทริปซิน ฟีนิลมีเทนซัลโฟนิลฟลูออไรด์ สารละลายเมทริกซ์ 0.3 โมลาร์ใน DMSO ส่วนผสมของสารยับยั้งโปรตีเอส AEBSF,เปปสแตติน A,E-64,ลูเพปติน,อะโปรตินินหรืออื่นๆเพิ่มเอ็กซ์เทมโพโร

เม็ดของเซลล์ที่ล้างด้วยบัฟเฟอร์ฟอสเฟต จะถูกแขวนลอยใหม่ในบัฟเฟอร์และทิ้งไว้15นาทีภายใต้การกวนเบาๆ จากนั้นไลเซตจะถูกหมุนเหวี่ยงที่14,000รอบต่อนาที เป็นเวลา10นาที เทลงในส่วนย่อยและความเข้มข้นทั้งหมดของ โปรตีน ในนั้นจะถูกกำหนด ส่วนใหญ่มักใช้วิธีแบรดฟอร์ด ความเข้มข้นของโปรตีน200ถึง400ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตรเป็นที่ยอมรับมากที่สุด สำหรับการวิเคราะห์เพิ่มเติม ต่อจากนั้นมีการใช้ตัวแปร ELISA กับดักแบบธรรมดาเป็นสิ่งสำคัญมาก

ซึ่งจะมีการควบคุมหลายด้านให้ได้มากที่สุด อย่างน้อยกลุ่มควบคุมเชิงบวกที่รู้จัก กลุ่มควบคุมเชิงลบที่รู้จัก เช่นเดียวกับไลเสตที่มีชื่อเดียวกัน แต่เซลล์ที่ไม่ถูกกระตุ้นไลเซตของเซลล์ที่บำบัดด้วย สารที่เกี่ยวข้องทางชีวเคมีกับตัวกระตุ้น การกำหนดปัจจัยการถอดความในเนื้อหา ภายในนิวเคลียร์ ขั้นตอนการรับเศษส่วนของนิวเคลียสของเซลล์ที่น่าสนใจ เซลล์ในหลอดรูปกรวยขนาด15มิลลิลิตร ล้างในน้ำเกลือบัฟเฟอร์ฟอสเฟต PBS 10 มิลลิลิตร ที่ 800 กรัมเป็นเวลา 6 นาที

ส่วนลอยจะถูกลบออกและเพิ่มบัฟเฟอร์ สลายตัวไฮโปโทนิกลงในเม็ดเซลล์ในอัตรา 0.5 มิลลิลิตรของบัฟเฟอร์ เซลล์เอ็กซ์เท็มโพโรไม่เร็วกว่า 10 นาทีก่อนที่จะเพิ่มลงในเซลล์5ไมโครลิตรของสารยับยั้งฟอสฟาเตส 5 ไมโครลิตรของสารยับยั้งโปรตีเอส 5 ไมโครลิตรของไดไทโอไทรอิทอล0.5ไมโครลิตรถูกเติมลงในไฮโปโทนิกบัฟเฟอร์0.5มิลลิลิตร ผสมเซลล์เบาๆในบัฟเฟอร์ไฮโปโทนิก ถ่ายโอนไปยังหลอดที่สะอาด 1.5 มิลลิลิตร และปล่อยบนน้ำแข็งเป็นเวลา 10 นาที

เติม 25 ไมโครลิตรต่อ 0.5 มิลลิลิตร วัสดุทำงานของสารระเหยผงซักฟอก 0.1 เปอร์เซ็นต์และผสมเป็นเวลา 5 วินาทีปั่นแยกที่800กรัม เป็นเวลา5ถึง6นาที4 องศาเซลเซียส ส่วนลอยเหนือตะกอนถูกแยกออกจากกัน ประกอบด้วยโปรตีนไซโตพลาสซึมและอาจเป็นประโยชน์ สำหรับการวิเคราะห์แยกกัน และเม็ดนิวเคลียร์ถูกแขวนลอยใหม่ในบัฟเฟอร์ล้างนิวเคลียร์ 1 มิลลิลิตร 10 ไมโครลิตรของสารยับยั้งฟอสฟาเตส 10 ไมโครลิตรของสารยับยั้งโปรตีเอส 10 ไมโครลิตร

บทความอื่นๆที่น่าสนใจ : เสริมริมฝีปาก อธิบายเกี่ยวกับวิธีการเสริมริมฝีปากด้วยวิธีต่างๆที่ได้พิสูน์แล้ว

นานาสาระ ล่าสุด
Banner 1
Banner 2
Banner 3
Banner 4